實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Quantitative Real-time PCR)技術(shù),簡(jiǎn)稱qPCR,是在PCR反應(yīng)體系中加入熒光物質(zhì)(熒光染料或熒光標(biāo)記的特異性探針),利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。
與普通PCR相比,實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)是一次由定性技術(shù)向定量技術(shù)的飛躍。運(yùn)用該項(xiàng)技術(shù),可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行相對(duì)定量、定量和定性分析。
(圖:熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)過(guò)程)
數(shù)字PCR
數(shù)字PCR即Digital PCR(dPCR),它是一種核酸分子定量技術(shù)。相較于qPCR,數(shù)字PCR可讓你能夠直接數(shù)出DNA分子的個(gè)數(shù),是對(duì)起始樣品的定量。PCR實(shí)際上是一個(gè)在模板DNA、引物(模板片段兩端的已知序列)和四種脫氧核苷酸等存在的情況下,DNA聚合酶依賴的酶促合成反應(yīng),擴(kuò)增的特異性取決于引物與模板DNA的特異結(jié)合。
(圖:數(shù)字PCR技術(shù)原理)
根據(jù)微反應(yīng)單元的不同形式,數(shù)字PCR產(chǎn)品可分為微板式、微滴式和芯片式等。目前,市場(chǎng)上主要的數(shù)字PCR產(chǎn)品主要是基于微滴式和芯片式。
三代核酸檢測(cè)技術(shù)對(duì)比:
熒光定量PCR
(圖:熒光定量PCR光路圖)
圖:熒光定量PCR光譜)
(圖:數(shù)字PCR光路圖)
((圖:數(shù)字PCR光譜))